紫外可見光分光光度計的使用（二）

    分光光度計的使用：在了解基本原理的基礎上，分光光度計的使用主要從以下幾個方面著手：

   光源和波長的選擇：根據所測定的物質的性質，選擇合適的光源和波長。一般在可見光范 圍選擇鎢燈，紫外選擇氘燈，但現在也有的紫外可見分光光度計在設計上已取消光源選擇，只要一打開機器，兩種光源都打開。初學者常犯的錯誤是忽視波長的選擇，教學中常遇到的事情是學生把樣品測完了才發(fā)現波長選錯了，究其原因是沒有檢查波長設置。因此，在教學中，我 們經常強調使用分光光度計時，第一步是打開電源，第二步就是檢查波長。如果是繼續(xù)別人后使用儀器，則第一步就是檢查波長。

   樣品測定：用于分光光度計測定樣品物質含量的基本原理是，樣品在一定波長下光吸收值 的大小與樣品中該物質濃度成正比。而最好的線性關系是在光吸收值為0.3 ～0.7時。因此，測定前要經過預實驗確定合適的樣品濃度，讓反應后的待測溶液的光吸收值位于這個范圍內。否則，待測數據不能正確反映實際變化。學生常有的一個 區(qū)是光吸收超過1.0以上時，將待測液稀釋后測定。 實驗數據表明，這種做法是不正確的，樣品稀釋應該在反應前而不應在反應后。

   如果不同樣品之間濃度差異較大，則在測定時應先測定低濃度(淺色 )，再定測高濃度(深色)，這樣可以避免反復洗比色杯。不僅節(jié)省時間，還可以避免洗杯后潤洗所造成的誤差。為 了減少比色杯的光吸收誤差，除了測定前校正比色杯外，可以在測定中平行樣品間使用同一個比色杯測定。

   當分光光度計使用時，每次測定樣品時應先用對照校正零點(機器和光吸收)，然后再將待測樣品拉人光路進行測定。 實際操作時也可以只校正光吸收零點，當光吸收零點出現較大誤差時，再全部校正。因為分光光度法是以物質光吸收作為設計基礎的，一般測定時常以蒸餾水等作為參照調正儀器的零點和光吸收的零點。測定樣品得到的光吸收值減去空白管光吸收值，再 去計算含量。 但實際上，比較以空白管代替蒸餾水管來調儀器的零點和光吸收零點，所測得的光吸收值和一般操作所測定的光吸收值是一樣的。但這樣做的結果不僅簡便了實驗操作，而且 消除了試劑本身的光吸收值。